ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA檢測試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。
ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA檢測試劑盒中似不恰當(dāng)。
ELISA檢測試劑盒常壓滅菌操作要點(diǎn):
(1)進(jìn)鍋不擠壓：擺放待滅菌的菌種袋必須分層，每層菌種袋不可擺太擠，要留一定空隙，不能相互擠壓。不適宜將菌種袋臥疊，要分層立放，以保證蒸汽暢流和接種穴完好。為了避免棉塞易潮濕，可在棉塞上蓋一層薄膜或油紙，但覆蓋物不可太大，否則會影響上下層蒸汽暢流；也可將4個(gè)菌種袋的棉塞并攏，棉塞向下一同塞到4個(gè)菌種袋的空隙中，這樣塑料袋規(guī)格要加長，但防潮效果良好。
(2)及時(shí)滅菌：隨裝隨滅。配料到滅菌間隔時(shí)間越短越好，以免雜菌自繁。大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)，要分鍋滅菌。
(3)攻頭：指開始滅菌時(shí)要大火猛燒。從開始滅菌到溫度達(dá)100℃，歷時(shí)越短越好，不能超過2小時(shí)，以免長時(shí)間高溫高濕造成雜菌自繁。當(dāng)然，ELISA檢測試劑盒要做到這一點(diǎn)還取決于滅菌鍋的保溫保氣性能。
(4)控中間：指鍋體下部溫度達(dá)到100~C后，控制火勢燒穩(wěn)火，維持8～10小時(shí)。此間，溫度不可回落，滅菌操作者要堅(jiān)守崗位，不能因通宵滅菌、疲勞或其他原因而懈怠，引起溫度回落。另外，常壓滅菌為了避免燒干應(yīng)注意及時(shí)向蒸發(fā)鍋內(nèi)補(bǔ)充水，但補(bǔ)水不能造成鍋內(nèi)水停止沸騰，可考慮補(bǔ)充沸水或微量連續(xù)補(bǔ)水。可見，要想節(jié)省燃料，又要做到上述這些，建造一個(gè)保溫、保汽性能良好的滅菌鍋十分重要。
(5)保尾：指滅菌結(jié)束前要再一次大火猛燒。目的在于加大蒸汽量，滅菌結(jié)束后打開柜門時(shí)有大量蒸汽冒出，帶走棉塞濕氣。但此時(shí)要將連體滅菌鍋中蒸發(fā)鍋內(nèi)的水排干。在開門時(shí)先將門拉開一條縫隙散氣，烘干棉塞，避免冷熱接觸產(chǎn)生冷凝水使棉塞受潮。
