熒光探針法PCR試劑盒是一種用于實時熒光定量PCR(qPCR)的預混式檢測工具包。其核心原理是利用一種特異性寡核苷酸探針，該探針兩端分別標記報告熒光基團和淬滅基團。當PCR反應發(fā)生時，Taq DNA聚合酶在延伸過程中會水解與模板結(jié)合的探針，導致報告基團與淬滅基團分離并產(chǎn)生熒光信號。該信號強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量成正比，從而實現(xiàn)對起始模板的精確定量。與染料法相比，探針法通過探針與模板的特異性結(jié)合，賦予了檢測特異性和準確性，廣泛應用于病原體檢測、基因分型、轉(zhuǎn)基因檢測等分子診斷與科研領(lǐng)域。
一、適用范圍
熒光探針法PCR試劑盒主要用于DNA分子的擴增和檢測，適用于醫(yī)學、生物學、環(huán)保、食品安全等領(lǐng)域的基因檢測和研究。
二、試劑盒組分
本試劑盒包括：TaqDNAPolymerase、核酸引物混合液、熒光探針、混合實時PCRbuffer、雜交探針引物等多種成分。
三、試劑盒儲存條件
試劑盒應存放于4℃環(huán)境中，不可凍結(jié)，避免光照和日曬。
四、操作步驟
1、從樣本中提取DNA并加入PCR反應管；
2、加入試劑盒中的TaqDNAPolymerase，核酸引物混合液和熒光探針；
3、加入混合實時PCRbuffer并充分混合；
4、進行PCR擴增，并進行實時熒光檢測；
5、數(shù)據(jù)分析。
五、注意事項
1、試劑盒使用前應充分搖勻；
2、反應體系中不能有任何雜質(zhì)；
3、PCR擴增過程中應嚴格控制反應溫度和時間，確保擴增效果；
4、在檢測結(jié)果中，若目標物對應熒光探針的熒光值高于負對照熒光值，則可認為該樣本中存在目標物。
六、實驗結(jié)果的解釋
若PCR擴增后，熒光信號強度大于背景噪聲，則說明目標物存在，反之則說明不存在。根據(jù)樣品的熒光信號，可以通過計算閾值來判斷目標物的數(shù)量。
七、質(zhì)量控制措施
為確保試劑盒質(zhì)量，本試劑盒的生產(chǎn)過程中進行了多項質(zhì)量控制措施。例如在成分篩選、產(chǎn)品生產(chǎn)和包裝過程中不斷監(jiān)測，確保每一批次的產(chǎn)品品質(zhì)穩(wěn)定可靠。同時，每批產(chǎn)品在發(fā)貨前還會進行校準和功能測試，確保滿足客戶需求。
八、檢測限定及注意事項
為確保檢測準確度，建議在每次檢測前使用模板對反應體系進行質(zhì)控。另外，在樣品處理、試劑配置、反應條件控制等步驟中均需注意無菌操作，盡可能排除外源性污染。
