質(zhì)粒菌株產(chǎn)品操作說明

一、擴增流程
收到產(chǎn)品后，請先根據(jù)產(chǎn)品管壁標簽來判斷產(chǎn)品形式，并在擴增前準確查找該質(zhì)粒菌株的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。
1、質(zhì)粒干粉（常溫運輸，存于-20度，90天保質(zhì)期，請務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆培養(yǎng)，不要直接使用和測序）
①收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl ddH2O去離子水溶解質(zhì)粒；
②取1支100μl 感受態(tài)于冰上解凍10min，加入2μl質(zhì)粒，再冰浴30min后，42℃熱激60s，不要攪動，再冰浴2min；（從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作）
③加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩37℃培養(yǎng)45min；
④6000rpm離心5min，僅留100μl上清液重懸細菌沉淀，并涂布至目標質(zhì)粒抗性的LB平板上；（可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進行涂布，可以比傳統(tǒng)涂布方法獲得更多轉(zhuǎn)化子）
⑤將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置37℃培養(yǎng)14h。如果要求是30度則培養(yǎng)20h；
（菌落過多則將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。沒有菌落則加入10μl質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。另不要直接轉(zhuǎn)表達感受態(tài)，要先轉(zhuǎn)克隆感受態(tài)，重提質(zhì)粒后再導(dǎo)入表達感受態(tài)）
⑥挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中，加入對應(yīng)抗生素，220rpm震蕩培養(yǎng)14h，根據(jù)實驗需要和質(zhì)粒提取試劑盒說明書提取質(zhì)粒。
2、甘油菌種（冰袋運輸，存于-80℃，保質(zhì)期90天，請務(wù)必劃線挑單克隆培養(yǎng)）
四區(qū)劃線后挑單菌落培養(yǎng)，酵母菌需要先液體復(fù)蘇再四區(qū)劃線，再挑單菌落液體培養(yǎng)。
3、穿刺菌種（冰袋運輸，存于4℃，保質(zhì)期7天）
穿刺接種，液體培養(yǎng)后四區(qū)劃線，再挑單菌落液體培養(yǎng)。
4、菌落平板（冰袋運輸，存于4℃，保質(zhì)期7天）
直接挑取單菌落至液體培養(yǎng)基中。
5、液體質(zhì)粒（冰袋運輸，存于-20℃，保質(zhì)期90天）
單獨提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。
6、濾紙質(zhì)粒（常溫運輸，存于-20度，90天保質(zhì)期，請務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆培養(yǎng)，不要直接使用和測序）
收到貨后將濾紙畫圈部分剪下放入EP管中，加100ul無菌水將濾紙浸濕并浸泡5min，吸取5ul質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，離心全涂。


二、轉(zhuǎn)化圖片