熒光探針法PCR試劑盒是一種基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)的分子生物學(xué)檢測(cè)工具，其核心特征在于利用序列特異性的熒光標(biāo)記探針來實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)核酸的高特異性擴(kuò)增與實(shí)時(shí)檢測(cè)。該試劑盒通常包含熱啟動(dòng)DNA聚合酶、引物、熒光探針、dNTPs及優(yōu)化緩沖液等組分。在擴(kuò)增過程中，探針與目標(biāo)序列結(jié)合后被聚合酶水解，釋放出熒光信號(hào)，其強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物量成正比，從而實(shí)現(xiàn)絕對(duì)定量分析。相較于染料法，該方法憑借探針的高特異性雜交，有效避免了非特異性擴(kuò)增的干擾，具有較高的準(zhǔn)確度和靈敏度，被廣泛應(yīng)用于病原體診斷、基因分型、轉(zhuǎn)基因檢測(cè)等精準(zhǔn)醫(yī)療和生命科學(xué)研究領(lǐng)域。
一、原理
熒光探針法PCR試劑盒采用的是一種雙探針PCR技術(shù)，其原理是在PCR擴(kuò)增的過程中，加入一種雙標(biāo)記的熒光探針，這種熒光探針是由一個(gè)末端與一個(gè)熒光染料分子共價(jià)結(jié)合，而另一末端與一個(gè)熒光熄滅器分子共價(jià)結(jié)合，探針含有一段特異性序列，可以與PCR引物配對(duì)結(jié)合。當(dāng)熒光探針與目標(biāo)DNA序列匹配時(shí)，酶促反應(yīng)會(huì)將其附加的熒光染料分子和熒光熄滅器分子分開，從而讓熒光染料發(fā)光，從而檢測(cè)到PCR擴(kuò)增結(jié)果。
二、優(yōu)點(diǎn)
相比于傳統(tǒng)的基于SYBRGreen的PCR技術(shù)，在很多方面都具有很大的優(yōu)勢(shì)，包括：
1.高靈敏度。可以檢測(cè)到非常少量的目標(biāo)序列，可達(dá)到10^-6~10^-9，不同于SYBRGreen的非特異性染色，在多種混合樣品中可以精準(zhǔn)地檢測(cè)出目標(biāo)序列。
2.高特異性。可以根據(jù)目標(biāo)DNA序列的特異性進(jìn)行擴(kuò)增，避免非特異性擴(kuò)增的影響，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和特異性。
3.高可靠性。具有穩(wěn)定的熒光熄滅器和熒光染料，效果可靠，不易失效，同時(shí)試劑盒中具有多重內(nèi)部引物控制，可確保PCR反應(yīng)全過程的準(zhǔn)確性。
4.高通量?？梢詫?shí)現(xiàn)高通量擴(kuò)增，該技術(shù)可以在大量的樣本中同時(shí)篩查目標(biāo)DNA序列的存在，并且可以在同一PCR反應(yīng)中檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)序列。
三、應(yīng)用
1.生命科學(xué)研究?？梢杂糜诨蚍中?、基因表達(dá)、蛋白質(zhì)鑒定、病毒診斷等方面的生命科學(xué)研究。
2.醫(yī)學(xué)診斷?？梢杂糜诙喾N疾病的診斷，如血液病、艾滋病、肺結(jié)核、乙肝等重要傳染病的檢測(cè)和診斷。
3.食品安全檢測(cè)?？梢杂糜谑称沸l(wèi)生檢測(cè)，檢測(cè)食品中的病原菌、霉菌、真菌等，包括食品中的脆弱質(zhì)量控制測(cè)試。
4.環(huán)境監(jiān)測(cè)?？梢杂糜诃h(huán)境監(jiān)測(cè)，檢測(cè)污水中的細(xì)菌、腸病毒等目標(biāo)物質(zhì)，民生和生態(tài)環(huán)境的廢水管理、排放檢測(cè)等。
總之，熒光探針法PCR試劑盒是一種比較成熟的PCR技術(shù)，其在臨床檢測(cè)、基因檢測(cè)、病原檢測(cè)、DNA定量、定性等方面有著廣泛的應(yīng)用前景。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，其中存在的問題將會(huì)逐步得到解決，使熒光探針法PCR技術(shù)在更多的領(lǐng)域發(fā)揮其潛力。
