酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法：

1、間接法（indirect elisa）

a.將已知抗原吸附于固相載體，酶標(biāo)記二抗。

b.檢測(cè)液相中未知抗原。

2、雙抗體夾心法（sandwich elisa）

a.將已知抗體吸附于固相載體，酶標(biāo)記一抗。

b.檢測(cè)液相中可溶性抗原。

3、競(jìng)爭(zhēng)法（competitive elisa）

a.將已知抗體或抗原吸附于固相載體，酶標(biāo)記抗體或抗原。

b.檢測(cè)液相中可溶性抗原或抗體。

酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當(dāng)前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。