PCR 反應(yīng)體系(PCR試劑)

耐熱DNA聚合酶

由于PCR的第一步需要在高溫(90℃)下分離DNA鏈，因此所有PCR反應(yīng)都需要能夠在高溫(約70°℃)下發(fā)揮作用的DNA聚合酶。

一種常見的PCR DNA聚合酶稱為Taq聚合酶，從嗜熱細(xì)菌水生棲熱菌中獲得，是一種熱穩(wěn)定性酶。

寡核苷酸引物

引物是短鏈核苷酸（DNA或RNA）與模板 DNA 互補(bǔ)，并充當(dāng) DNA/RNA聚合酶開始合成新 DNA的起點(diǎn)。引物是與模板DNA互補(bǔ)的短核苷酸鏈(DNA或RNA)，充當(dāng) DNA/RNA聚合酶DNA合成的起點(diǎn)。它們對(duì)于 DNA合成的開始是必需的。與在退火過程完成后產(chǎn)生氫鍵的變性相比，引物與單鏈DNA 退火所需的溫度(50-65°C)較低。

脫氧核糖核苷酸三磷酸(dNTP)

DNA聚合酶需要dNTP才能合成 DNA。

緩沖系統(tǒng)

得益于 PCR 緩沖液，PCR 反應(yīng)始終保持最佳條件。

PCR緩沖液中的主要成分為Tris-HCI、氯-化-鉀(KCI)和氯化鎂(MgCl 2)。

為了在PCR過程中保持pH穩(wěn)定,使用tris-HCI和KCI.為了確保 DNA聚合酶在 PCR 過程中正確進(jìn)行 DNA合成,鎂離子充當(dāng)酶的輔助因子。