禽腦脊髓炎病毒（AEV）熒光PCR核酸檢測試劑盒

禽腦脊髓炎病毒(AEV)熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書

【產品名稱】

通用名稱：禽腦脊髓炎病毒(AEV)核酸擴增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)

Name ：Avian encephalomyelitis virus (AEV) nucleic acid amplification kit (PCR fluorescent probe method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測全血等樣本中的禽腦脊髓炎病毒，用于禽腦脊髓炎病毒感染的輔助診斷，其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒用一對禽腦脊髓炎病毒特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術對禽腦脊髓炎病毒的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產的 DNA 提取試劑

盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）

NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設置：

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號

1 1 cycle 95℃ 10min 否

2 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結果分析判定

5.1結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據分析后圖像調節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

【標本要求】

標本采集：用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管

保存運輸：上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

取抗凝血下層血細胞 50uL，加入 100uL 雙蒸水吹勻

1.2DNA 提取

1) 對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液（固體標本加入50uL核酸提取液），

100℃恒溫處理 10 分鐘，13,000 rpm 離心 5 分鐘，取上清液轉移至新的 1.5ml

EP 管，-20℃保存；

【儲存條件和有效期】

試劑盒保存于-20±5℃，有效期 12 個月；

避免反復凍融，凍融次數(shù)不超過 5 次；試劑開瓶后，在室溫條件下放置時間不

應超過 8 小時；運輸采用干冰（或者冰袋）保持低溫，運輸時間不應超過 4 天。試

劑盒生產日期見產品標簽。

7. 質控標準

陰性質控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32；

以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

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2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據待檢測樣本總數(shù)，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

試劑 YP 反應液 酶液

用量（樣本數(shù)為 N） 20μl 1μl

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl，分別加入相應的反

應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

8. 產品性能指標

陰陽性參考品符合率：8 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合

率為 100％。

低檢測限：2.0×102copies/ml。

精密度：批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)（CV）均≤3%。

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